發(fā)布時(shí)間： 2021-09-11 點(diǎn)擊次數(shù)： 2869次
培養(yǎng)某一類(lèi)型細(xì)胞沒(méi)有固定的培養(yǎng)條件，
Gibco血清培養(yǎng)時(shí)該如何選對(duì)培養(yǎng)基呢？
一、合成培養(yǎng)基的配制
1.根據(jù)細(xì)胞目錄中的說(shuō)明，按下表選擇合適品牌及貨號(hào)的培養(yǎng)基干粉，用適量超純水充分溶解。
2.按要求添加碳酸氫鈉、谷氨酸鈉、HEPES等，充分?jǐn)嚢枋怪芙狻?/div>
3.調(diào)pH至7.2左右。
4.加水至最終體積。
5.在超凈臺(tái)中對(duì)溶液進(jìn)行濾過(guò)除菌，分裝入250 mL或500 mL玻璃瓶中，用翻帽塞塞緊瓶口。
6.瓶口封好，4℃冰箱貯存。
二、生長(zhǎng)培養(yǎng)基的配制
除無(wú)血清培養(yǎng)之外，各種合成培養(yǎng)基在使用前需加入一定量的血清和抗菌素。
培養(yǎng)基分裝成小瓶(100-200 mL)以便使用，翻帽塞塞緊瓶口。
按如下比例配制：基本培養(yǎng)基占80%-90%，血清占10%-20%。按1%體積分?jǐn)?shù)加入雙抗貯存液(青霉素+鏈霉素)，使青霉素和鏈霉素的終濃度分別為100 U/mL和100μ/mL。
三、Gibco血清的處理
市場(chǎng)上出售的血清一般做了滅菌處理，但在使用前還應(yīng)做熱滅活處理，即通過(guò)加熱的方法破壞補(bǔ)體(近來(lái)也有觀點(diǎn)認(rèn)為熱滅活處理是不必要的)。
1.將血清加熱至56℃并保持30 min，其間要不時(shí)輕輕晃動(dòng)，使受熱均勻，防止沉淀析出。
2.處理后的血清貯存于4℃。
3.血清在使用前最好進(jìn)行篩選以掌握血清的質(zhì)量。
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