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細(xì)胞培養(yǎng):一般細(xì)胞處理

發(fā)布時(shí)間: 2023-12-08  點(diǎn)擊次數(shù): 768次

 

處理培養(yǎng)細(xì)胞

從 19 世紀(jì)末開始,科學(xué)家們就從各種生物體(例如人類、小鼠、豬、雞和植物)中分離出自然環(huán)境中的細(xì)胞,并將它們置于體外(拉丁語(yǔ)“玻璃中")中。 ) 文化。實(shí)驗(yàn)細(xì)胞是從許多不同的組織和器官中提取的,例如腸、腎、血液、腦、乳腺和許多癌癥實(shí)體。

體外培養(yǎng)細(xì)胞的目的是模擬培養(yǎng)箱內(nèi)的體內(nèi)(拉丁語(yǔ)“活體中")條件,或者在進(jìn)行活細(xì)胞成像時(shí)甚至在顯微鏡下模擬體內(nèi)條件。每種細(xì)胞類型都需要定制培養(yǎng)參數(shù),以實(shí)現(xiàn)最佳的健康、活力和生長(zhǎng)。對(duì)于所有實(shí)驗(yàn),保持條件無菌、均質(zhì)和可重復(fù)至關(guān)重要,以獲得可比較的結(jié)果。

傳代、接種和冷凍細(xì)胞

為了保持細(xì)胞處于增殖狀態(tài),并防止它們達(dá)到過度匯合,以規(guī)定的時(shí)間間隔進(jìn)行傳代非常重要。必須定期進(jìn)行細(xì)胞傳代,以保持細(xì)胞處于培養(yǎng)狀態(tài)、實(shí)現(xiàn)體積放大或在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)接種它們。該過程也稱為細(xì)胞分裂或傳代培養(yǎng)。除其他因素外,傳代的最佳時(shí)間取決于增殖率以及所需的細(xì)胞數(shù)量。每種細(xì)胞類型的確切裂解方案都是b的。一般來說,貼壁細(xì)胞使用蛋白水解酶(主要是胰蛋白酶/EDTA)從基質(zhì)上分離,這對(duì)于消化其蛋白質(zhì)附著鍵是必需的。接下來,將細(xì)胞勻漿、計(jì)數(shù)并接種到新容器中,從而將傳代次數(shù)增加一倍。

傳代/傳代=將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)皿和生長(zhǎng)培養(yǎng)基中

一些細(xì)胞系,例如 HeLa 或其他缺乏細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的癌細(xì)胞,可以無限傳代而不喪失分裂能力(永生細(xì)胞系)。此外,某些胚胎細(xì)胞類型或多能干細(xì)胞也是如此。其他細(xì)胞,特別是原代細(xì)胞(例如,從成體器官中分離的細(xì)胞),在幾次傳代后將失去這種能力,因?yàn)樗鼈円唇?jīng)歷衰老,要么分化,要么死亡。因此,使用具有相似傳代數(shù)的細(xì)胞進(jìn)行可重復(fù)的實(shí)驗(yàn)非常重要。

對(duì)于細(xì)胞接種,需要選擇適合各自細(xì)胞類型、細(xì)胞培養(yǎng)容器和實(shí)驗(yàn)裝置的密度。如果密度太低,細(xì)胞可能會(huì)由于生長(zhǎng)因子釋放到培養(yǎng)基中不足而停止生長(zhǎng)。缺乏細(xì)胞間和細(xì)胞間基質(zhì)通訊的單個(gè)細(xì)胞甚至可能因一種特殊形式的程序性細(xì)胞死亡(稱為失巢凋亡)而死亡。如果接種密度太高,細(xì)胞可能在很短的時(shí)間內(nèi)就已經(jīng)達(dá)到過度匯合。這會(huì)導(dǎo)致增殖受損和細(xì)胞與基質(zhì)分離,從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)條件不可重復(fù)。

標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞類型可在 –80°C 下短期保存,或在液氮中長(zhǎng)期保存。為此,需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行胰蛋白酶化、均質(zhì)化和離心,然后使用特殊的冷凍介質(zhì)進(jìn)行冷凍。為了對(duì)抗此過程引起的細(xì)胞應(yīng)激,建議使用具有高回收率的冷凍介質(zhì)。此外,解凍過程必須快速進(jìn)行(例如,在37°C的水浴中),然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基中并將其放入培養(yǎng)箱中以創(chuàng)造生理?xiàng)l件。


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